PCR定義PCR(Polymerase Chain Reaction)即聚合酶鏈式反應,是指在DNA聚合酶催化下,以母鏈DNA為模板,以特定引物為延伸起點,通過變性、退火、延伸等步驟,體外復制出與母鏈模板DNA互補的子鏈DNA的過程。是一項DNA體外合成放大技術,能快速特異地在體外擴增任何目的DNA。可用于基.....
PCR相關技術 一.錨定PCR(anchored PCR): ?引進錨定引物,可以幫助克服序列未知或序列未全知的障礙。 ?在DNA3’-末端加上poly(dG)尾,與此相對應的錨定引物poly(dC)一般應在十二聚以上。 二.不對稱PCR(asymmetric PCR) 不對稱PCR主要是在PCR體系中設計不同的引物濃度,兩條引物濃度比為1:50或1:100,前12個循環(huán)兩條模板等量擴增,之后低濃度引物消耗殆盡,其擴增產(chǎn)物減少以至于無;而高濃度引物介導產(chǎn)生的擴增產(chǎn)物(即單鏈DNA)逐漸增加,可得到大量單鏈DNA(ssDNA)用于直接測序。 三.反向PCR(inverse PCR) 四.多重PCR(multiplex PCR) 多重PCR是用多對引物同時對模板DNA上的多個區(qū)域進行擴增。 多重PCR技術的難點不是在于其原理和操作的復雜性,而是在于其多對引物的設計,必需保證多對引物之間不形成引物二聚體,引物與目標模板區(qū)域具有高度特異性。 應用于基因診斷,對與**相關的基因(龐大)進行擴增檢測。 五.逆轉錄PCR(reverse transcription PCR,RT-PCR) ?由mRNA逆轉錄產(chǎn)生cDNA鏈作為PCR反應模板。 ?逆轉錄合成cDNA時,引物可選用特異引物、隨機六聚體引物或寡聚dT(12-18)。 ?設計RT-PCR的引物時*好是分散在不同的外顯子上,以免基因組DNA的污染導致假陽性結果
PCR相關技術 一.錨定PCR(anchored PCR): ?引進錨定引物,可以幫助克服序列未知或序列未全知的障礙。 ?在DNA3’-末端加上poly(dG)尾,與此相對應的錨定引物poly(dC)一般應在十二聚以上。 二.不對稱PCR(asymmetric PCR) 不對稱PCR主要是在PCR體系中設計不同的引物濃度,兩條引物濃度比為1:50或1:100,前12個循環(huán)兩條模板等量擴增,之后低濃度引物消耗殆盡,其擴增產(chǎn)物減少以至于無;而高濃度引物介導產(chǎn)生的擴增產(chǎn)物(即單鏈DNA)逐漸增加,可得到大量單鏈DNA(ssDNA)用于直接測序。 三.反向PCR(inverse PCR)
四.多重PCR(multiplex PCR) 多重PCR是用多對引物同時對模板DNA上的多個區(qū)域進行擴增。 多重PCR技術的難點不是在于其原理和操作的復雜性,而是在于其多對引物的設計,必需保證多對引物之間不形成引物二聚體,引物與目標模板區(qū)域具有高度特異性。 應用于基因診斷,對與**相關的基因(龐大)進行擴增檢測。
五.逆轉錄PCR(reverse transcription PCR,RT-PCR) ?由mRNA逆轉錄產(chǎn)生cDNA鏈作為PCR反應模板。 ?逆轉錄合成cDNA時,引物可選用特異引物、隨機六聚體引物或寡聚dT(12-18)。 ?設計RT-PCR的引物時*好是分散在不同的外顯子上,以免基因組DNA的污染導致假陽性結果