**膠體金技術(shù)的基本原理:

膠體金在弱堿環(huán)境下帶負(fù)電荷，可與蛋白質(zhì)分子的正電荷基團(tuán)形成牢固的結(jié)合，由于這種結(jié)合是靜電結(jié)合，所以不影響蛋白質(zhì)的生物特性。 膠體金除了與蛋白質(zhì)結(jié)合以外，還可以與許多其它生物大分子結(jié)合，如SPA、PHA、ConA等。根據(jù)膠體金的一些物理性狀，如高電子密度、顆粒大小、形狀及顏色反應(yīng)，加上結(jié)合物的**和生物學(xué)特性，因而使膠體金廣泛地應(yīng)用于**學(xué)、組織學(xué)、病理學(xué)和細(xì)胞生物學(xué)等領(lǐng)域。 膠體金標(biāo)記，實(shí)質(zhì)上是蛋白質(zhì)等高分子被吸附到膠體金顆粒表面的包被過(guò)程。吸附機(jī)理可能是膠體金顆粒表面負(fù)電荷，與蛋白質(zhì)的正電荷基團(tuán)因靜電吸附而形成牢固結(jié)合。用還原法可以方便地從氯金酸制備各種不同粒徑、也就是不同顏色的膠體金顆粒。這種球形的粒子對(duì)蛋白質(zhì)有很強(qiáng)的吸附功能，可以與葡萄球菌A蛋白、**球蛋白、**、糖蛋白、酶、***、**、牛血清白蛋白多肽綴合物等非共價(jià)結(jié)合，因而在基礎(chǔ)研究和臨床實(shí)驗(yàn)中成為非常有用的工具。 **金標(biāo)記技術(shù)(Immunogold labelling technique) 主要利用了金顆粒具有高電子密度的特性，在金標(biāo)蛋白結(jié)合處，在顯微鏡下可見(jiàn)黑褐色顆粒，當(dāng)這些標(biāo)記物在相應(yīng)的配體處大量聚集時(shí)，肉眼可見(jiàn)紅色或粉紅色斑點(diǎn)，因而用于定性或半定量的快速**檢測(cè)方法中，這一反應(yīng)也可以通過(guò)銀顆粒的沉積被放大，稱(chēng)之為**金銀染色。

膠體金技術(shù)具有方便快捷、特異敏感、穩(wěn)定性強(qiáng)、不需要特殊設(shè)備和試劑、結(jié)果判斷直觀等優(yōu)點(diǎn), 因而特別適合于廣大基層檢驗(yàn)人員以及大批量檢測(cè)和大面積普查等, 具有巨大的發(fā)展?jié)摿蛷V闊的應(yīng)用前景。

用容量瓶量取200ml超純水加入到 500ml錐形瓶中，將錐形瓶置于磁力加熱攪拌器加熱板上，放入磁力攪拌子，打開(kāi)攪拌旋鈕至適當(dāng)速度。用移液器吸取2ml 1%氯金酸溶液于上述 200ml超純水中，攪拌1min，關(guān)閉攪拌旋鈕，打開(kāi)加熱旋鈕，加熱至沸騰。打開(kāi)攪拌旋鈕至適當(dāng)速度，快速加入經(jīng)微孔濾膜過(guò)濾。1% 檸檬酸三鈉溶液0.8ml，溶液在2分鐘內(nèi)由灰色變黑色*后變?yōu)榧t色，再繼續(xù)加熱攪拌 10分鐘。關(guān)掉加熱旋鈕，適當(dāng)速度攪拌至室溫，定容至200ml，4~C保存。

常用的**膠體金檢測(cè)技術(shù): (1)**膠體金光鏡染色法 細(xì)胞懸液涂片或組織切片，可用膠體金標(biāo)記的抗體進(jìn)行染色，也可在膠體金標(biāo)記的基礎(chǔ)上，以銀顯影液增強(qiáng)標(biāo)記，使被還原的銀原子沉積于已標(biāo)記的金顆粒表面，可明顯增強(qiáng)膠體金標(biāo)記的敏感性。 (2)**膠體金電鏡染色法 可用膠體金標(biāo)記的抗體或抗抗體與負(fù)染病毒樣本或組織超薄切片結(jié)合，然后進(jìn)行負(fù)染。可用于病毒形態(tài)的觀察和病毒檢測(cè)。 斑點(diǎn)**金滲濾法 (3)應(yīng)用微孔濾膜(如膜)作載體，先將抗原或抗體點(diǎn)于膜上，封閉后加待檢樣本，洗滌后用膠體金標(biāo)記的抗體檢測(cè)相應(yīng)的抗原或抗體。 (4)膠體金**層析法 將特異性的抗原或抗體以條帶狀固定在膜上，膠體金標(biāo)記試劑(抗體或單克隆抗體)吸附在結(jié)合墊上，當(dāng)待檢樣本加到試紙條一端的樣本墊上后，通過(guò)毛細(xì)作用向前移動(dòng)，溶解結(jié)合墊上的膠體金標(biāo)記試劑后相互反應(yīng)，當(dāng)移動(dòng)至固定的抗原或抗體的區(qū)域時(shí)，待檢物與金標(biāo)試劑的結(jié)合物又與之發(fā)生特異性結(jié)合而被截留，聚集在檢測(cè)帶上，可通過(guò)肉眼觀察到顯色結(jié)果。該法現(xiàn)已發(fā)展成為診斷試紙條，使用十分方便。