布病的檢測(cè)方法

布病的檢測(cè)方法
虎紅平板凝集試驗(yàn)（RBPT）：
實(shí)驗(yàn)原理：該試驗(yàn)又稱為板式孟加拉紅平板凝集實(shí)驗(yàn)。由于所用的抗原是酸性（PH3.6—3.9）帶色的抗原，該抗原與被檢血清作用時(shí)能抑制血清中的IgM類抗體的凝集活性，檢查出的抗體是IgG類，因此提高了該項(xiàng)反應(yīng)的特異性。器材與試劑：虎紅平板凝集抗原、載玻片、移液器、槍頭
方法：在載玻片上加抗原30μl，加入30μl被檢血清，混勻。在5min內(nèi)觀察結(jié)果，輕搖載玻片，出現(xiàn)凝集顆粒為陽(yáng)性，否則為陰性。
試管凝集試驗(yàn)（SAT）：
實(shí)驗(yàn)原理：布魯氏菌侵入機(jī)體后，會(huì)刺激機(jī)體產(chǎn)生特異性抗體，這種抗體可與相應(yīng)的布氏菌抗原發(fā)生特異性結(jié)合，在電介質(zhì)作用下，就會(huì)形成肉眼可見(jiàn)的凝集反應(yīng)，也就是用已知抗原查未知抗體。
器材與試劑：布病試管凝集抗原、生理鹽水、試管、移液管、移液器、小燒杯、槍頭、試管架
方法：1.準(zhǔn)備試管：取9支試管放在試管架中編號(hào)。1號(hào)管為血清對(duì)照管，2—8號(hào)為試驗(yàn)管，9號(hào)為抗原對(duì)照管。
2.血清稀釋：1號(hào)管加入2.3ml生理鹽水，2號(hào)不加，3號(hào)—9號(hào)各加入0.5ml生理鹽水。1號(hào)管加入0.2ml被檢血清，混勻后各吸0.5ml加入2、3號(hào)管。從3號(hào)開(kāi)始做倍比稀釋，8號(hào)吸0.5ml棄去。
3.加入抗原：10倍稀釋抗原（用燒杯，1ml抗原9ml生理鹽水），從2號(hào)開(kāi)始每支加0.5ml稀釋后抗原，從2號(hào)開(kāi)始，血清被稀釋濃度為1：25、1:50、1:100、1:200、1:400、1:800、1:1600
4.凝集試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)比濁管的配制（判定透明程度的依據(jù)）：取5支試管，編號(hào)，取稀釋后的抗原再做2倍稀釋。
管號(hào) 抗原稀釋液鹽水(ml) 清亮度標(biāo)記
(ml)
1 0.00 1.00 100% ++++ 2 0.25 0.75 75% +++ 3 0.50 0.50 50% ++
4 0.75 0.25 25% +
5 1.00 0.00 0% —

充分混勻，將所有試管放入溫箱中37℃培養(yǎng)20—22小時(shí)取出，在室溫下放置1—2小時(shí)后觀察結(jié)果。
5.結(jié)果判定：1號(hào)管清亮透明，9號(hào)管均勻渾濁（對(duì)比）
假如試驗(yàn)管包括6號(hào)之前都透明，取出6號(hào)管比較，若其與2號(hào)比較管相近，則被檢血清結(jié)果為1:400，+++
牛血清凝集價(jià)在1:100以上時(shí)，該血清樣品為布病陽(yáng)性，血清凝集價(jià)在1:50時(shí)，該血清樣品為疑似反應(yīng)，經(jīng)3—4周后須再做一次檢查，扔為疑似反應(yīng)者判為陽(yáng)性，凝集價(jià)在1:50以下則為陰性反應(yīng)。
羊和豬血清在1:25凝集為可疑，在1:50或以上凝集為陽(yáng)性。
總結(jié)：RBPT在使用時(shí)操作方便、快捷，適用于大規(guī)模的篩選檢疫，但易出現(xiàn)假陽(yáng)性。SAT特異性高，檢測(cè)比較準(zhǔn)確，但操作麻煩，費(fèi)時(shí)費(fèi)力，不適用于大規(guī)模的篩選檢測(cè)，不能區(qū)分人工**和自然感染。先用RBPT篩選，陽(yáng)性樣品再用SAT復(fù)核以做出比較準(zhǔn)確的判斷。

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